蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法

前  言

    本方法用以快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒。

    本标准由中华人民共和国卫生部提出.

    本标准由农业部农药检定所负责起草

    本标准主要起草人:高晓辉、朱光艳、陶传江、秦冬梅、龚勇、刘光学、何艺兵。

    本标准由农业部农药检定所负责解释。

1 、范围

         本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。

本标准适用于叶菜类（除韭菜）、果菜类、豆菜类、瓜菜类（除胡萝卜、茭白等）中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、杀扑磷、敌敌畏、克百威、涕灭威、抗蚜威、丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速灭威、残杀威、异丙威等的农药残毒快速检测。

2、原理

         有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒学原理，用在对农药残留的检测中，加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药有残毒情况，即：

乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药-------酶活性被抑制

                         活性被抑制 -------样本中含有机磷或氨基甲酸酯类农药

乙酰胆碱酯酶+样本提取液             

                         活性正常 -------- 制样本中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药

         如以乙酰硫代胆碱（AsCh）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。

3、试剂

3.1 PH8磷酸缓冲液。

3.2丁酰胆碱酯酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，△A值控制在0.4-0.8之间。

3.3底物：碘化硫代丁酰胆碱（S-butyrythiocholin iodide,即BTCI），用缓冲液溶解。

3.4显色剂：二硫代二硝基苯甲酸[5，5-dithiobis (nitrobenzoic acid,即DTNB)，用缓冲液溶解。

4、仪器

4.1波长为410±3nm专用速测仪，或可见分光光度计。

4.2电子天平（准确度0.1g）。

4.3微型样品混合器。

4. 4台式培养箱。

4. 5可调移液枪(10-100цL,1-5mL)。

4. 6不锈钢取样器(内径2cm)。

4. 7配套玻璃仪器及其他配件等.

5、检测

5. 1取样

        用不锈钢管取样器来自不同植株叶片(至少8-10片叶子)的样本;果菜从表皮至果肉1-1.5cm处取样.

5. 2检测过程

        取2g切碎的样本(非叶菜类取4g),放入提取瓶内,加入20ml缓冲液,震荡1-2min,倒出提取液,静止3-5min;于小试管内分别加入50цL酶,3ml样本提取液,50цL显色剂,于37-38℃下放置30min后再分别加入50цL底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定.

5. 3检测结果计算

        检测结果按式(1)计算:

         式中: △Ac--- 对照组3min后与3min前吸光值之差;

                    △Ax--- 样本3min后与3min前吸光值之差.

         抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有2次以上重复检测,几次重复检测的重现性应在80%以上.

6、最低检出浓度

        本方法的最低检出浓度见表1

表1.